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La formation est axée sur l’application de la technologie de la
PCR en temps réel (Real-Time PCR), avec un accent particulier
sur la pratique.
– Comprendre et appliquer les diverses techniques de
quantification des acides nucléiques ARN et ADN
– Acquérir les connaissances théoriques et pratiques permettant de
choisir la stratégie de PCR quantitative la mieux adaptée
aux contraintes expérimentales
– Avoir une vue d’ensemble des logiciels couramment utilisés
pour l’analyse des résultats.
Présentation des différents principes de la PCR quantitative
– Rappels sur les fondamentaux de la PCR quantitative, notion de
Cq, formats de fluorescence, méthodes de calcul de l’efficacité
– Mise au point d’une PCR quantitative : optimisation, validation,
plan d’expérience, stratégies de normalisation, dilutions etc.
– Calibration et droite d’étalonnage
Stratégies en PCR quantitative
– Méthode par quantification absolue (standard externe)
– Méthode par quantification relative avec et sans standard externe
– Normes MIQE
TRAVAUX DIRIGÉS
– Design et conception des amorces, choix des amorces, résolution
des problèmes de spécificité et de sensibilité
– Principes de la PCR relative, choix des gènes de normalisation
avec différents logiciels, suivi de la normalisation par la méthode
Δ Δ Ct
Ingénieurs, techniciens.
Maîtriser les techniques de base de la biologie moléculaire
Enseignements : 40 %
Travaux pratiques : 60 %
QCM, TD et TP.
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