Validation pratique de votre système CRISPR/Cas9

Acquérir une une procédure complète de validation de son
système CRISPR-Cas avant de passer sur son système cellulaire
– Etre capable de réaliser une transcription in vitro. Etre autonome
pour réaliser des purifications d'ADN et d'ARN et choisir ses
propres "outils"de genome editing

ENSEIGNEMENTS THÉORIQUES
– Stratégie de clonage des guides
– Le choix des vecteurs d’expressions du sytème CRISPR/cas9,
(eucaryote animal , végétal, procaryote)
– Modulation d’expression d’un système cellulaire par
CRISPR cas13
– Les sytèmes CRISPRi, CRISPRa
PARTIE PRATIQUE - TP
Objet de l’expérimentation sur la journée : validation de vos
guide sgRNA
– Amplification par PCR d’un gène cible
– Contrôle et purification de l’amplicon
– Transcription in vitro du guide et purification du guide
– Choix de la Cas9
– Assemblage In Vitro du guide et de la Cas9
– Hydrolyse in vitro de la cible amplifiée par PCR par le
Système CRISPR/cas9
– Contrôle du produit d’hydrolyse par électrophorèse
– Conclusions sur la validation du système