qPCR ou PCR quantitative : de la théorie à la réalisation pratique

La formation est axée sur l’application de la technologie de la PCR en temps réel (Real-Time PCR), avec un accent particulier sur la pratique.

– Comprendre et appliquer les diverses techniques de quantification des acides nucléiques ARN et ADN

– Acquérir les connaissances théoriques et pratiques permettant de choisir la stratégie de PCR quantitative la mieux adaptée aux contraintes expérimentales

– Avoir une vue d’ensemble des logiciels couramment utilisés pour l’analyse des résultats.

LES MATINS : COURS ET TRAVAUX DIRIGÉS

Présentation des différents principes de la PCR quantitative 

– Rappels sur les fondamentaux de la PCR quantitative, notion de Cq, formats de fluorescence, méthodes de calcul de l’efficacité

– Mise au point d’une PCR quantitative : optimisation, validation, plan d’expérience, stratégies de normalisation, dilutions etc.

– Calibration et droite d’étalonnage

Stratégies en PCR quantitative

– Méthode par quantification absolue (standard externe)

– Méthode par quantification relative avec et sans standard externe

– Normes MIQE

TRAVAUX DIRIGÉS

– Design et conception des amorces, choix des amorces, résolution des problèmes de spécificité et de sensibilité

– Principes de la PCR relative, choix des gènes de normalisation avec différents logiciels, suivi de la normalisation par la méthode Δ Δ Ct