Initiation théorique et pratique à la technique PCR

Comprendre le principe de la réaction de polymérisation en chaîne
(PCR) et savoir la mettre en œuvre dans son laboratoire.

ENSEIGNEMENTS
L’état des connaissances aujourd’hui
– Rappels sur l’organisation des êtres vivants et la structure des
génomes (notions de gène, génotype, phénotype, ADN, ARN, protéine)
Focus sur la technique de PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)
– Principe de l’amplification d’ADN par PCR
TRAVAUX DIRIGÉS
– Amorces et PCR : règles et stratégies de choix des amorces
PCR (utilisation d’outils bioinformatiques)
– Optimisations des conditions d’une PCR : température,
concentrations, gestes techniques, risque de contamination,
qualité et quantité initiale d’ADN, notion de gènes de ménage
PARTIE PRATIQUE - TP
– Application de la PCR à la recherche de polymorphismes
(Génotypage) : notions de marqueurs moléculaires
(microsatellites, SNP, RAPD ...)
Ateliers pratiques
– Extraction d’ADN génomique à partir de différentes sources
cellulaires et contrôle de la qualité des ADN extraits
– Identification d’une espèce d’origine bactérienne, végétale ou animale
par la technique de PCR (extraction d’ADN, MixPCR, contrôle)
– Analyse des résultats par électrophorèse sur gel d’agarose
Travaux dirigés
– Présentation des banques de données en ligne
– Analyse de séquences d’ADN par différents logiciels pour le
design d’amorces
– Optimisation de conditions de PCR