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- Stratégies de quantifications, perfectionnement et génotypage par qPCR
Stratégies de quantifications, perfectionnement et génotypage par qPCR
Objectifs
Programme
Comprendre et appliquer les diverses techniques de quantification
des acides nucléiques (ARN et ADN) par PCR en temps réel. La
formation est axée sur l’application théorique de la technologie de
la PCR en temps réel (Real-Time PCR).
ENSEIGNEMENTS
– Rappels sur les bases théoriques de la biologie moléculaire
– Généralités et optimisation sur la PCR
– Présentation des différents principes de la PCR quantitative
– Rappels sur les fondamentaux de la PCR quantitative
TRAVAUX DIRIGÉS
Mise au point d’une PCR quantitative : Optimisation, Validation,
Plan d’expérience, Stratégies de Normalisation, Dilutions limites,
Standards externes/internes, Réalisation d’une quantification
absolue, Calibration et droite d’étalonnage.
STRATÉGIES EN PCR QUANTITATIVE
– Organisation d’un laboratoire de PCR en temps réel
– Conditions de travail
– Choix de réactifs
– Validation de méthode
ÉTUDES DE CAS – TRAVAUX DIRIGÉS – ANALYSES DE
PROTOCOLES
– Étude d’une gamme de calibration ; Calculs de Cq et analyse
différentielle de Cq ; Mesures de l’efficacité ; Réalisation d’une
gamme de référence, calibration et droite d’étalonnage ; Variante
de la méthode des droites standard ; Estimation de la spécificité
d’amplification, analyse de sa fonction dérivée. Analyse de
polymorphismes par HRM (courbes de fusion à haute résolution)
– Études de cas et conseils spécifiques aux participants
Public visé
Personnels de structures, publiques ou privées, qui souhaitent acquérir
et approfondir les bases de la PCR quantitative en temps réel.
Prérequis
avoir les bases en biologie moléculaire et en PCR
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