HPLC : principes et pratique pour le contrôle qualité

Découvrir ou revoir les principes de base de l’HPLC : Techniques et phases stationnaires courantes. Appréhender les éléments liés aux précautions à l’utilisation des colonnes HPLC et à la résolution des

anomalies.

PRÉSENTATION DE LA CLHP

Les techniques courantes de la CLHP

– Chromatographie d’adsorption, chromatographie en Phase Inverse, échange d’ions, techniques du recul d’ionisation et de la paire d’ions

– Chromatographie d’interaction hydrophile (HILIC)

MÉTHODES DE FABRICATION DES SUPPORTS POUR LA CHROMATOGRAPHIE

Le traitement de la silice, les techniques de greffage

– Conséquences sur les caractéristiques des colonnes

– Les tendances récentes des techniques de greffage

– Monolithes et particules Fused Core Shell

– Les supports polaires non greffés, polaires greffés, non polaires greffés et leurs domaines d’application

PRÉCAUTIONS À L’UTILISATION DES COLONNES

– Installation

– Utilisation

– Influence des phases mobiles tamponnées

– Influence du contre-ion, influence de l’ion, influence de la concentration, influence de la température

– Règles de préparation des phases mobiles tamponnées

– Suivi des performances

– Protection et stockage

RÉSOLUTION DES ANOMALIES DE FONCTIONNEMENT

– Problèmes liés à la forme des pics

– Effets extra colonne, effet de surcharge, effets des interactions secondaires, effets de la distribution des échantillons, effets de tassement, effets des équilibres secondaires

– Problèmes liés au temps de rétention

– Variation aléatoire du temps de rétention, dérive du temps de rétention

– Autres anomalies

– Pics «fantômes», perte de charge, dérive de la ligne de base

RÔLE DU TEST DE CONFORMITÉ EN CLHP

– Critère de répétabilité, critère de résolution, critère d’asymétrie, critère d’efficacité

– Bruit de fond, dérive de la ligne de base, critères de rétention, perte de charge, facteurs de réponse