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– Comprendre et appliquer les diverses méthodes et techniques de quantification des acides nucléiques ARN et ADN
– Acquérir les connaissances théoriques et pratiques de la dPCR
– Quantification absolue
– Avoir une vue d’ensemble des logiciels couramment utilisés pour l’analyse des résultats
MATINS : COURS ET TRAVAUX DIRIGÉS
Rappel sur la technique de la qPCR
– Rappels sur les fondamentaux de la PCR quantitative, notion de Cq, formats de fluorescence, méthodes de calcul de l’efficacité
– Mise au point d’une PCR quantitative : Optimisation, Validation, Plan d’expérience
– Stratégies de Normalisation, Dilutions etc.
– Calibration et droite d’étalonnage
Présentation de la technique de la dPCR :
– Génération et partition en micro gouttelettes
– Préparation des échantillons
– Utilisation du système de fluidique
– Lecture par fluorescence
– Estimation de la quantification et concentration de la cible
– Correction de l’estimation avec la Loi Poisson et ses différents paramètres
Stratégies de la dPCR :
– Quantification absolue : détermination du nombre de copies d’un gène
– Variation du nombre de copies : CNV
– Détection d’un évènement rare : mutation rare avec détermination de l’abondance d’une mutation dans un mélange de cellules normales
– Quantification de pathogènes : virus, bactéries, parasites
– Expression gènique : intérêt pour visualiser de faibles variations d’expression
NORMES DIGITAL MIQE
Travaux dirigés :
– Design et conception des amorces, choix des amorces, résolution des problèmes de spécificité et de sensibilité
– Etude de cas et analyses de résultats à partir d’exemples
Tout public ayant des connaissances de bases en biologie moléculaire.
Maîtriser les techniques de base de la biologie moléculaire
40 % Enseignements - 10 % Travaux dirigés - 50 % Travaux pratiques
QCM, TD et TP.
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