Développement de méthode LC / MS pour l'analyse quantitative

• Optimiser une méthode LC/MS adaptée au besoin analytique.
• Identifier et maîtriser les problèmes rencontrés lors du développement d'une méthode LC/MS.

Approche du dosage et étalonnage

• Mettre en œuvre une méthode de dosage par encadrement pour déterminer la concentration par comparaison avec des standards encadrants.
• Réaliser un dosage par ajout dosé pour corriger les effets de matrice et améliorer l'exactitude.
• Appliquer une stratégie d'étalonnage externe ou interne.

Paramètres analytiques et validation

• Définir spécificité, sensibilité, précision, exactitude et robustesse pour évaluer la performance analytique.
• Déterminer LOD, LOQ, LLOQ et ULOQ.
• Utiliser standards et échantillons de contrôle qualité (QC).

Optimisation - Source d'ionisation

• Choisir le mode d'ionisation selon les propriétés physico-chimiques de l'analyte.
• Principes et maîtrise de l'Electrospray (ESI), APCI et APPI.

Séparation chromatographique

• Sélectionner la phase mobile et la phase stationnaire pour optimiser séparation et résolution.
• Optimiser le gradient d'élution pour améliorer séparation, réduire le temps d'analyse et affiner la forme des pics.

Instrumentation et acquisition

• Comparer performances d'un quadripole (Quad) et d'un analyseur temps de vol (ToF) pour la quantification.
• Distinguer les modes d'acquisition SIM et MRM.
• Ajuster dwell time et duty cycle pour maximiser le nombre de points par pic.

Validation de la courbe de calibration

• Définir les critères d'acceptation d'une courbe selon recommandations réglementaires.
• Évaluer la linéarité et choisir un modèle de pondération adapté.
• Comparer LOD et LOQ dans le cadre de validation de méthode.

Gestion des problèmes courants

• Identifier et corriger la déformation des pics chromatographiques.
• Prévenir adsorption et carry-over.
• Résoudre la non-linéarité des courbes de calibration et évaluer l'effet matrice.
• Sélectionner un étalon interne approprié.

• Mise en œuvre de méthodes de dosage (encadrement, ajout dosé).
• Applications pratiques d'étalonnage externe et interne.
• Optimisation expérimentale de l'ionisation (ESI, APCI, APPI) et des paramètres chromatographiques.
• Réglages instrumentaux pour acquisition (SIM, MRM) et exercices sur dwell time / duty cycle.
• Exercices de dépannage : déformation de pics, carry-over, effets matrice et non-linéarité.